احنا هيك بنكون بالـ Slides الأولى حسبنا تركيز الـ
Total بروتين في بلازمة الدم، هلق بدنا نحسب تركيز
الـ albumin نفسه، قد إيش تركيز الـ albumin في بلازمة
الدم؟ Albumin is the most abundant circulating
plasma protein، 40 ل 60% من الـ total، بيحكي لي أن الـ
albumin هو الموجود بوفرة وبكثرة وبأعلى تركيز في
البلازمة، ويشكل نصف الـ total بروتين، Playing important
roles in the maintenance of the colloid osmotic
pressure of blood، يعني يحافظ على الضغط الإسموزي في
الدم، in the transport of various ions, acids, and
hormones، يعني إيش الوظيفتين؟ بيحافظ على الضغط
الإسموزي في الدم، وكمان بيشتغل كـ transporter، كناقل
يعني بينقل وبيحمل الـ ions والـ acids والـ hormones
من مكان لمكان، بيوصل، تمام؟ لو سألناكوا سؤال: كيف
الـ Albumin بيشتغل وبيحافظ على الضغط الإسموزي للدم
عن طريق أنه بيمنع خروج السوائل اللي موجودة في
الأوعية الدموية إلى خارج أنسجة الجسم، تمام؟
وبالتالي، لو شخص عنده نقص في هذا البروتين، هتلاحظي
أنه انتفخ، صار عنده إدمة، تمام؟ ليش؟ انتفخ لأنه نقص
الـ albumin، وبالتالي حيصير في خروج للسوائل من الأوعية
الدموية إلى أنسجة الجسم، وبالتالي حيصير في عنده
انتفاخات، حيصير عنده ماء كثير في جسمه، تمام؟ إذن
بيحافظ على الضغط الإسموزي من خلال أنه بيمنع خروج
السوائل من الأوعية الدموية إلى أنسجة الجسم، وبيشتغل
كناقل، it is a globular protein، نوعه globular
protein، with a molecular weight of approximately 66
ألف دالتون، مش مشكلة نعرف حجم البروتين، and is
unique among major plasma proteins in containing
no carbohydrate، يعني هو الـ major بروتين اللي
موجود في الـ plasma، وله relatively low content
of tryptophan، الألبومين عبارة عن سلسلة من الأحماض
الأمينية، الـ tryptophan هو عبارة عن حمض أميني،
لكن الألبومين لا يعني بيحتوي على tryptophan
على هذا الحمض الأميني، ولكن بـ low concentration،
بكميات قليلة، And is an anion at pH 7.4، يعني هذا
البروتين يحمل شحنة سالبة لما يكون الـ pH تبع الدم
neutral، متعادل 7.4، وهذا الطبيعي، إن الـ pH تبع الدم
عند الإنسان الطبيعي neutral، وبالتالي الألبومين في
هذا الوقت بيحمل شحنة سالبة، These properties
have been exploited in the estimation of albumin
in body fluids، هذه الصفات والخصائص بتاعة
الألبومين مكنتنا من معرفة طرق من أجل حساب تركيز
الألبومين في البلازما، الـ Analysis Methods زي ما
حكينا، في عندنا طرق كثيرة لحساب الـ Total Protein
وبرضه في عندي طرق كثيرة لحساب الـ Albumin، تركيز
الـ Albumin في بلازما الدم، أول طريقة: طريقة الترسيب،
الـ Precipitation، وهذه طريقة quantitative، يعني
بتعطيكي تركيز الـ Albumin بدقة، بتعطيكي قيمة عددية،
رقمية، Salt Fractionation، Solvent Fractionation، Acid
Fractionation،
بيحكي لي إن هذه الطريقة تستخدم ملح أو solvent أو
acid، واحد من هدول، إيش هيعمله؟ هيرسبه، يعمل precipitation لـ
الـ albumin، للشغل اللي أنا بدي
أجيبه، تمام؟ وبناخد هذا البروتين وبتتم قياسه بطريقة
معينة، الـ Principle of the Analysis، مبدأ هذه
الطريقة: «Changes of net charge of a protein result
in precipitation»، مبدأها إنها بتغير شحنات
للبروتينات، وبالتالي بترسب البروتين اللي أنت بدك
تقيسه، بترسبيه، وبتاخده، وبتقيسه، إذا من اسمها
precipitation، فقط هذا اللي بدنا نعرفه عنها، وحتى يا
جماعة، بسأل كلكم في هذه الشغلات في الامتحان، بس
بطريقتنا المعتمدة، Trip to file content، برضه هذه
طريقة quantitative، هذه الطريقة بتعتمد على أن
العينة تبعي بيكون فيها الـ Total Protein، كلها الـ
albumin والـ globulin، تمام؟ بتروح تجيب Reagent، هذا
الـ Reagent بيحتوي على مادة حمضية اسمها الـ
glycosic acid، هذه المادة لما بتروح تضيفيها على الـ
serum اللي فيه كل الـ Total Protein، هذه المادة يعني
لما بتلاقي الـ glycosic acid بتروح بتربط بالـ
tryptophan، تمام؟ اتفقنا إن الألبومين ما فيه
tryptophan، فيه ولكن بتركيز قليل جداً، مين اللي حكينا
فيه tryptophan؟ الـ Globulins، الـ Alpha 1، الـ
Alpha 2، الـ Beta والـ Gamma، كل الـ Globulins، تركيب
هذه البروتينات فيه tryptophan بكميات كبيرة،
فالـ glycosic acid هذه المادة وين فيه tryptophan
بتروح تربط فيه، وبالتالي بتعطيني لون، محصلة
الـ reaction، اللون الـ purple، معنى الكلام هذه
المادة فقط هتتفاعل مع الـ Globulins، مع الـ Alpha 1،
والـ Alpha 2، والـ Beta، والـ Gamma، إذا أنا هنا فقط على
الـ Spectrophotometer بروح أقرأ اللون اللي طلع
والتركيز اللي هحسبه هذا تركيز الـ Globulin، تمام؟ في
الآخر، بطبق قانون الـ Total Protein، أنا بكون جايبها
من قبل، حسبت الـ Total Protein ككل، تمام؟ بطرحه من
تركيز الـ Globulin اللي أنا جبته، والمحصلة
هيطلع تركيز الـ albumin، يعني هذه طريقة غير مباشرة،
بيجيب مادة الـ glycosic acid، بيضيفها على الـ serum،
هذه المادة تربط فقط بالـ tryptophan اللي موجود في
الـ globulin، وبالتالي الـ albumin مش هيرتبط، ومش
هيصير في reaction معاه، وبالتالي المحصلة اللون، بنجيب
هذا اللون على جهاز الـ Spectrophotometer، وبنجيب
تركيز الـ Globulins، كلها الـ alpha 1، والـ alpha 2، والـ beta،
والـ gamma، فبنطرح تركيز الـ Total Protein ككل من
الـ Globulins، هيطلع عندي تركيز الألبومين، تمام؟ طريقة
الـ Electrophoresis، برضه طريقة quantitative،
حكيت لكم، بنجيب عينة الـ serum وبنعملها loading على
supportive media، على جل، على nitrocellulose، تمام؟
وبتفصل العينة لخمس bands، الألبومين، الـ alpha 1، الـ alpha
2، الـ beta، الـ gamma، بنفصلها خمس bands، هدول
الباندات بقدر أنا أحسب تركيز كل باند على حدى، كل
بروتين على حدى، بقدر أحسب تركيز الـ Albumin، الـ
Principle of Analysis، الألبومين separated from
other proteins، بنفصل عن البروتينات الأخرى، in
an electrical field، بمجال كهربائي، Present Staining of
Albumin Fraction، Multiplied by Total Protein Value،
طبعاً يا جماعة، طريقة الـ Electrophoresis بالتفصيل
هتاخدوها السنة الرابعة، فصل ثاني، هنحسب تركيز الـ
albumin بهذه الطريقة،
نكمل بالطرق immunochemical، طرق مناعية كيميائية،
يعني بيعتبر الـ albumin كأنه Antigen، مش بروتين تمام، فبيعتبره
عبارة عن Antigen، فبروح أجيب Antibody ضد هذا الـ
Antigen، فبتكون عندي مُركّب، هذا المُركّب كيف بقيسه؟
بما أنه Antibody-Antigen Reaction، يعني بده طرق
مناعية، Radial Immunodiffusion، التربيدومتري،
النفلومتري، Radio Immunoassay، Enzyme Immunoassay،
كلها تقنيات مناعية، هتاخدوها في المناعة عشان تقيسوا
تركيز الألبومين، «Dye Binding»، هذه طريقتنا، إن
الألبومين بيروح مرتبط بـ dye، بصبغة معينة، وبتكون
عندي Complex، وبنقرأ هذا الـ Complex على الـ
Spectrophotometer، بكل بساطة، الـ dye هذه منها أنواع
كثيرة، إنما بتستخدمي Bromocresol Green أو Bromocresol
Purple، هذه أنواع الـ dye، تمام؟ وهذه طريقة
quantitative، برضه، هذه طريقة أخرى، نفس المبدأ، dye
-binding، ولكنها semi-quantitative، شفتوا،
الـ strips في السوائل الخانة التابعة لـ protein، مش
بيكون عندنا protein، حكينالكوا يقصد فيها الـ albumin،
يعني هل في الـ strip بيقيس هل فيه بروتينات بشكل
عام ولا لا، الـ strip تبع الـ urine بيقيس هل فيه
albumin في الـ urine ولا لا، مش هل فيه بروتين، هل
فيه الـ albumin، نوع من أنواع البروتينات، هل موجود
الـ albumin في الـ urine ولا لا، ففي الخانة تبع
الـ albumin، بيكون عندنا صبغة اسمها Bromophenol Blue،
صح ولا لأ؟ لون المربع، لون المربع في الـ strip
بيكون أصفر، إذا فكرين، لو حطيت الـ strip في عينة
الـ urine وكان الـ urine جواته albumin، الألبومين
هيتفاعل مع هذه الصبغة، مع الـ Bromophenol Blue، ويحول
اللون الأصفر للون أزرق، فاللون الأزرق معناه إنه فيه
ألبومين في الـ urine، Bromophenol Blue، الـ strip في الـ
strip changed color، بتغير اللون من أصفر لأزرق،
معناه في عندنا ألبومين، وهذه الطريقة الشائعة للكشف عن
البروتين جوا الـ ألبومين، sorry، هذه طريقة شائعة للكشف
عن الـ albumin جوا الـ urine، تمام؟ للكشف عن الـ
protein جوا الـ urine، الـ dye binding techniques،
هذه الـ method اللي احنا هنستخدمها عشان نحسب تركيز
الـ albumin في الـ serum، Serum albumin is most often
assayed using dye binding techniques، يعني معظم
الطرُق، معظم الكِتَابات بتستخدم طريقة الـ dye binding
techniques عشان نحسب الـ albumin، الألبومين prefer bind
to anionic dyes that don't attract globulins، قالوا
احنا كيف ممكن فكرة الفحص؟ أروح أجيب dye، صبغة، هذه
الصبغة الألبومين، الألبومين، الألبومين
وجهة ما شافها، هيرتبط فيها، لكن باقي البروتينات الـ
globulins الأخرى مش هترتبط مع هذه الـ dye، وبالتالي
هيتكون عندي Complex، مركب، عبارة عن ألبومين + dye، تمام؟
البرامو كريزول البربل، والبرامو كريزول جرين هما
المستخدمين أكثر، هذه أنواع الـ dye اللي بتستخدم
بشكل واسع، تمام؟ الـ amount of light absorbed by
the albumin-dye complex is proportional to the
amount of albumin present، إذا الـ reagent تبعنا
هيكون فيه dye، فيه صبغة، والـ serum تبعي هيكون فيه
الـ albumin، لما بحط الـ reagent على الـ serum،
هتتفاعل الـ dye مع الألبومين، يرتبطوا مع بعض،
وهيتكون عندك Complex ملون، شدة اللون هتتناسب
طردياً مع تركيز الألبومين في الدم، كل ما كان
اللون أغمق، بتوقع يكون تركيز الألبومين أعلى، تمام؟
طبعاً يا جماعة، هنا plasma albumin levels، نوع
العينة serum أو plasma، although important for
management and follow-up، a very little value in
clinical diagnosis، بقول لي إنه على الرغم من أهمية
معرفة تركيز الـ albumin من أجل متابعة الحالات
المرضية، إلا إنه بيعتبر هذا الفحص قيمته مش
كبيرة كثير، very little في الحالات التشخيصية
السريرية، تمام؟ أو في الحالات التشخيصية مش كتير له
قيمة، تمام، جملة مش عارفة... مش عارفة، مادة صحّتها
albumin concentration في البلازما بيجي عندي
reagent خاص في كيت خاص للـ albumin test بيكون الـ
reagent يحتوي على شغلتين أساسيتين، يحتوي على الـ
Bromocresol Green، على هذه الـ dye، على هذه الصبغة
وهذه الصبغة بتكون تحمل الشحنة السالبة، تمام الصبغة
بتكون شحنتها سالبة، واسمها Bromocresol Green، موجودة
في الـ Reagent أيضًا يا جماعة، الـ Reagent يحتوي
على buffer، اسم الـ buffer citrate buffer، وهذا الـ
buffer بيعطيني acidic media، يعني بيجعل الـ Reagent
البيئة تشتغله acidic، تمام؟ 4.3 pH
جيت لو الـ Reagent هذا اللي جواته citrate Buffer و
جواته الـ Bromocresol Green، لما تروح تضيفيه على
الـ Serum تبع الـ patient اللي جواته البروتينات و
بما فيها الـ albumin، الـ acidic pH، لما يكون الـ pH
حامضي، الـ Albumin بياخد الـ Positive Charge، بياخد
الشحنة الموجبة، وبالتالي الصبغة شحنتها سالبة، والـ
Albumin شحنته موجبة، إيش حيصير؟ حيصير بينهم ارتباط
وبالتالي هيتكون عندي Complex، اسمه Albumin-Bromocresol Green Complex
Complex، وهذا الـ Complex يتم قياسه على الـ
Spectrophotometer، نقرأ "Forms with Bromocresol green a colored
compound with a color intensity proportional to
the albumin concentration present in the sample"
the albumin concentration present in the sample
لما ترتبط الصبغة مع الألبومين، بعطيني complex ملون
هذا الـ complex الملون، شدة اللون تتناسب تناسبًا طرديًا مع
تركيز الألبومين في العينة،الارتباط للألبومين يزيد الـ
Absorbance في الـ 546، بتم القراءة من جهاز
اللي يتم قياسه بالـ Spectrophotometer، إذا المعادلة
مهمة، الصبغة بتكون موجودة في الـ Reagent، الـ
Bromocresol Green، تحمل الشحنة السالبة، وعندنا citrate
Buffer اللي بيوفر لنا pH 4.3 Acidic، لما بنضيفهم على
عينة الـ patient اللي فيها الـ albumin، الـ albumin
هياخد الشحنة الموجبة، ويصير ارتباط، ويتكون هذا الـ complex
العينة يا جماعة، العينة المفضلة Serum، ومسموح برضه
بالبلازما، تمام؟ Serum is the specimen of choice،
fasting is not required، نفس
الـ total protein، الصوم مش ضروري، although it may
be desirable since marked lipemia interferes in
the BCG assay، لكن بيقول لي بنفضل الصوم عشان نتجنب
الليبيميا، يعني عينة ليبيميا يعني فيها لبن، فيها
دهون، لأن أنت بتكون ماكن، وبالتالي الدهون هتزيد في
العينة، وبالتالي هتتحول العينة لـ lipemic sample،
لونها هيك بتكون معكرة، وزي الحليب بالظبط، هذه الـ
lipemia هتعمل interference في طريقة الـ BCG Assay،
اللي هي الـ Bromocresol Green، يعني طريقة هذه الـ
BCG Assay، ممنوع يكون عينات المريض تكون lipemic، لو
كانت lipemic هتأثر على نتيجة الفحص، فعشان هيك
بنقول لكم بنفضل الصوم، desirable معناها يفضل
Venostasis should be avoided when collecting
samples، الـ Venostasis مصطلح يُطلق على الناس اللي
بتربط الـ tourniquet وبتجعد سنة لما تيجي تسحب
blood، يعني بربط الـ tourniquet وبعدين بروح بجيب الـ
needle والسرنج والكحول والسواب وأجهز أغراضي و
الـ tourniquet مربوط لعشر دقائق قبل السحب، هذا غلط
هذا في أي فحص ممنوع، أجهز أغراضي، بعدين بربط الـ
tourniquet، فالـ Venostasis معناها أطول فترة وأنا رابطة
الـ tourniquet، هذه الحالة يا جماعة بتؤدي إلى، لو
أنت تركت الـ tourniquet فترة مربوطة في يد المريض
هيؤدي ذلك إلى Hemoconcentration، تركيز الألبومين في
العينة، يعني الألبومين هيزيد تركيزه، ليش؟ ومش بس
الألبومين، يعني كل البروتينات هيزيد تركيزها، أنا بتوقع
إنه إيش اللي بيصير؟ هل جيت أنت طولتي في ربط الـ
tourniquet، تمام؟ جعدتي مثلاً ربع ساعة وأنت ربطت
الـ tourniquet، هل جيت الوريد اللي أنتِ بدك تجيئي
تحطي فيه الـ needle؟ نتيجة الضغط بيصير يطلع
السوائل اللي موجودة فيه لخارج أنسجة الجسم، وبالتالي
هيضل فيه شو؟ في الوريد إيش هيضل فيه؟ هيضل فقط
الـ بروتينات متركزة فيه، لكن السوائل اللي كانت
البروتينات بتسبح فيها، طلع من كتر الضغط على اليد
إذا وجود الـ tourniquet هيجعل الـ body fluid
السوائل الموجودة في الأوعية تطلع لبرة، تطلع خارج
الجسم، تمام؟ مش خارج الجسم يعني إحنا نشوفها،
تطلع يعني إلى أنسجة الجسم، وبالتالي الوريد نفسه
اللي هحط فيه الـ needle، هيكون فيه بروتينات أكثر،
يعني هيكون فيه مليان بروتينات متركزة، تمام؟ إذن
بدنا نتجنب الـ venostasis، تمام؟
البروسيجر لفحص الـ Albumin Test، نفس الـ Total
بروتين يا جماعة بالظبط، بس طبعاً الـ Reagent بختلف
بتجيبي تلات أنابيب، تكتبي الـ Blank وStandard والـ
Patient Sample، بتجيبي الـ Reagent تبع الـ Albumin
بتحطي على التلات أنابيب 1000 ميكرولتر، علبة الـ
Standard بتكون جاية مع الـ Kit، هذا الـ Standard
جواته مادة الألبومين وإله تركيز معين، بتكون مكتوب
على العلبة نفسها، تمام؟ تاخدي منها 5 ميكرولتر،
تحطيها في أنبوبة الـ Standard، تعملي mix، تيجي على
الـ Serum أو البلازما تبع الـ patient، تاخدي منه 5
ميكرولتر، وبتحطيها في أنبوبة الـ Patient، تعملي mix
بعد ما تعمل mix للأنابيب، برضه incubation، عشرة
minutes at room temperature، تضبطي الجهاز الـ
Spectrophotometer على 546، أول شيء بقرا الـ blank
بعدين بقرا الـ standard وباخد absorbance له، وبقرا
الـ sample وباخد absorbance له، الـ color تبع
التفاعل بيضل stable لمدة ساعة، وفي الآخر بالطبق
الـ Beer's Law، الـ Concentration للـ Sample تساوي
الـ Absorbance للـ Sample على الـ Absorbance للـ
Standard ضرب Concentration للـ Standard، كل
الشغلات اللي في القانون موجودة، بحط الأرقام وبجيب
تركيز الألبومين بالـ mg/dl، تمام؟ هنا يا
جماعة كاتب لكم الـ Reference Range للـ albumin
للـ Adult اللي بيكون أعمارهم من 21 سنة لـ 44 سنة
عند الرجال بيكون 33 لـ 61 g/L، قلت لكم لو
بدي g/dL بقسم على 10، يعني 3.3 لـ 6.1 g/dL
وعند النساء من 2.7 لـ 5.6 g/dL
تركيز الألبومين، تمام؟ Interfering
factors، شغلات بتعمل لبس أثناء قياس الـ albumin
albumin is decreased in، يعني الألبومين بيقل في
حالات مختلفة، حالات pregnancy، المرأة الحامل بيقل
بس هذا مش حالة مرضية يا جماعة، بدنا نفهم حالة عرضية
يعني خلاص بعد ما تولد المرأة، برجع الألبومين طبيعي
المرأة الحامل بتكون عندها بلازما كثيرة، وبالتالي
الألبومين هيتخفف، تمام؟ last trimester، خاصة في آخر
شهر، owing to increased plasma volume، السبب أن الـ
plasma volume عندها حجمه كبير، وبالتالي بتخفف
الألبومين، الناس اللي بتاخد oral birth control، حبوب
تنظيم النسل، هذه الحبوب فيها استروجين، تمام؟ وبعض
الأدوية بتخفض من مستوى الألبومين في الدم، prolonged
bed rest، الناس اللي بيقعدوا لفترات طويلة قاعدين،
تمام؟ دائمًا يعني يعني نوع الكسول اللي دائمًا طول
حياته هو قاعد، هذا لو فحصنا ألبومينه هتلاقي عنده
منخفض، على عكس يا جماعة، إذا بتسمعوا شخص بيوقف كثير
شغله هيك وهو دائمًا هو واقف، الشغل تبعه بيطلب إنه
يضل واقف، لو جينا فحصناه، أخدنا منه عينة urine
وعملنا فيه الـ strip، هتلاقي خانة البروتين موجبة، فيها
بروتين، الـ urine تبعه فيه بروتين، مش تحكي لي والله
عنده مشكلة في الكلى، الكلى سربت البروتين في الـ
urine، لأ، بتكون المشكلة الوقفة الكثيرة ولفترات
طويلة، بتنزل البروتين في الـ urine، تمام؟ نفس الشيء
هنا، شخص نايم كثير، هذا دائمًا بيكون عنده الألبومين
منخفض، الناس الـ Intravenous Fluid، بركب محلول وأجي
أسحب له عينة من منطقة المحلول، مسائل يعني
البروتينات اللي في منطقة المحلول هتكون
مخففة، المحلول اللي هو الـ Rapid Hydration، تعطي أنتَ
محلول سريع أو "Over Hydration"، يعني تعطي محلول
كثير، يكون عنده جفاف، وتعطي محلول كثير، تسحب منه
عينة، هتلاقي البروتينات قليلة، تركيزها قليل لأنها
مخففة، Note a urine microalbumin test is a test to
detect very small levels of blood protein albumin
in your urine، هذا الفحص اسمه urine microalbumin
test، أو إله اسم آخر microalbuminuria test، يستخدم
للكشف عن الألبومين حتى لو كان تركيز هذا الـ
albumin very very small في الـ urine، هذا يا جماعة
الفحص ممكن يكون بيشتغل بطريقتين، ممكن يكون qualitative
وممكن يكون quantitative، qualitative نظام الـ strip، شفت
strip الحمل؟ نفس النظام، بروح بحط نقطة urine وبيطلع
الـ urine بالـ strip وبعطيك خطين، لو أعطاك خطين الـ
strip معناها في عنده ألبومين في الـ urine، إذا طريقة
qualitative، يعني عنده ألبومين في الـ urine ولا ما
عنده، أما الطريقة quantitative، فإله Kit خاص
اسمه Kit الـ Microalbuminuria Test، هذا الـ Kit
بيقيس لي تركيز الألبومين بالظبط، قد ايش تركيز الألبومين
بالظبط اللي موجود في الـ urine حتى لو كانت كميته
قليلة، فإله Kit خاص فيه، إذا بنشغل الفحص إما
qualitative يعني موجود الألبومين ولا لأ، أو
quantitative، ممكن برضه أحسب تركيزه في الـ urine، A
microalbumin test is used، استخدام هذا الفحص to
detect the early signs of kidney damage in people
who are at risk of developing kidney disease
أحيانًا يا جماعة، هذا الفحص كتير مهم لمرضى السكري،
بين فترة وفترة أعملهم إياه، لأن حكينا بيصير عندهم
مضاعفات، ومن المضاعفات nephropathy، مشاكل في
النفريون في الكلى، فتبدأ الكلى تسرب عندهم الألبومين
فأنا بدي أعمل detection early، بدي أعمل كشف مبكر عن
الخلل اللي بده يصيب الكلى، يعني أول ما الكلى تبدأ
تنزل ألبومين، بدي أكشف بسرعة هذه المشكلة عشان ألحق
المريض، أعطيه علاج قبل ما نوصل لمراحل يصير عنده
الـ فشل كلوي كامل، تمام؟ فإحنا مهم الي عشان early
detection، نكشف كشف مبكر عن الألبومين اللي موجود في
الـ urine عشان نمنع الـ complications، تمام؟
يعطيكم العافية